Otimização de protocolos de extração de RNA em diferentes tecidos de milho.

Neste trabalho, foram testados cinco métodos de extração de RNA (CTAB microextração, Concert? Invitrogen, Concert? Adaptado, TRI Reagente® Sigma e TRI Reagente® Adaptado), em dois diferentes tecidos de milho (mesocótilo e raiz), com o objetivo de estabelecer um método eficiente de extração de RNA, visando posteriormente estudos de expressão gênica. Observou-se que o método Concert,utilizando o protocolo adaptado, foi o mais eficiente para a extração de RNA de ambos os tecidos de plântulas de milho, originando 2351,35 ?g por 100 mg de tecido para mesocótilo e 893,75 ?g por 100 mg de tecido para raiz, considerando tanto a quantidade como a qualidade das amostras, podendo ser submetidas às etapas posteriores de tratamento com DNAse e construção de cDNA para estudos de expressão gênica. Pôde-se observar que pequenas modificações nos protocolos, como, por exemplo, mudança no tempo e na posição dos tubos durante a incubação e o incremento de duas lavagens com clorofórmio, podem melhorar muito tanto a qualidade quanto a quantidade do RNA extraído

Protocolo para extração de RNA em sementes de café.

As sementes são um importante meio de propagação de culturas do gênero Coffea, sendo de fundamental importância a obtenção de sementes com alta qualidade, para a produção de mudas. Estudos moleculares têm se mostrado úteis na obtenção de classes distintas de marcadores moleculares que auxiliam na elucidação dos fatores que afetam a qualidade das sementes. Para o estudo de genes expressos em sementes, há necessidade de se obter RNA de boa qualidade e em quantidades satisfatórias. Assim, nesse estudo, objetivou-se testar e aperfeiçoar metodologia para extração de RNA em sementes de café (Coffea arabica L.) para posterior utilização em técnicas de análise de expressão gênica. Para a quantificação de RNA foram utilizadas amostras de sementes inteiras e endosperma, secos e embebidos, com e sem liofilização. A extração do RNA total foi realizada conforme o protocolo Pury Link Plant RNA Reagent (Invitrogen?) e a qualidade e integridade do RNA extraído foram verificadas por meio de eletroforese em gel de agarose 1,5%. A utilização de sementes de café secas e sem liofilização foi eficiente na obtenção de RNA de melhor qualidade

Extração de RNA total de folhas de algodoeiro.

bitstream/CNPA/20893/1/CIRTEC113.pd

Avaliação de diferentes métodos para extração de RNA total de folhas e raízes de braquiária.

A extração de RNA a partir de tecidos específicos consiste no primeiro passo para estudos de expressão gênica e caracterização de transcritos. Plantas, em geral, contêm grande quantidade de compostos fenólicos e/ou polissacarídeos em seus tecidos, o que pode comprometer a extração e purificação de moléculas de RNA. O objetivo principal deste trabalho foi testar diferentes protocolos para extrair RNA total de folhas e raízes de braquiária. Sementes de Brachiaria decumbens cv. Basilisk foram germinadas e plântulas com12 dias foram utilizadas. As extrações de RNA foram feitas em duplicatas de 200 mg de amostras de folhas ou raízes pulverizadas com nitrogênio líquido. Para as extrações de RNA de folhas foram testados os reagentes Trizol® e Brazol® e para as extrações de RNA de raízes foram testados estes reagentes mais dois kits comerciais: SV Wizard Isolation RNA system (Promega®) e Invisorb Spin Plant RNA Mini Kit (Invitek®). ANOVA e teste Tukey (1% de significância) foram utilizados para comparar as médias das concentrações e de qualidade das amostras de RNA extraídas. Os resultados mostraram diferenças não-significativas entre as concentrações e a qualidade do RNA extraído de folhas pelos reagentes Trizol® e Brazol®. Entretanto, para as amostras de raízes as concentrações e qualidade do RNA isolado foram significativamente diferentes, sendo o reagente Trizol® mais eficiente. Os dois kits isolaram menores concentrações de RNA com qualidade inferir a obtida com os dois reagentes testados. Para síntese de DNA complementar (cDNA) foram testadas duas enzimas: SuperScript RTII (Invitrogen®) e M-MLV-RT (Sigma®), sendo esta última mais eficiente, pois foi possível obter maior quantidade e qualidade de cDNA, com relação a presença de contaminantes. Esses resultados podem ser considerados como ponto de partida para a execução de trabalhos sobre expressão gênica em espécies de Brachiaria.bitstream/item/56268/1/BP29.pd

Processamento de amostras provenientes do trato reprodutivo feminino para extração de RNA genômico do vírus da artrite-encefalite caprina e diagnóstico molecular por RT-nested PCR.

Este trabalho descreve os procedimentos necessários para a coleta e processamento de amostras provenientes ou recuperadas do trato reprodutivo feminino de cabras infectadas pelo CAEV para posterior extração do RNA viral por meio de um método baseado em centrifugação em coluna de sílica. A avaliação da presença do RNA nestas amostras é feita diretamente por meio da reação de RT-nested PCR, potencial método de diagnóstico molecular da CAE.bitstream/item/31705/1/UMT-Cot-117.pdfMetodologia Cientifica

Padronização das técnicas de processamento e extração de RNA viral de amostras de sêmen caprino.

O sêmen se mostrou uma amostra adequada para a detecção de RNA genômico do vírus da artrite-encefalite caprina; As sucessivas lavagens com PBS estéril foram eficientes para a retirada do fluido seminal do restante dos componentes celulares; A incubação do sêmen fresco a 60°C por 30 minutos, após a homogenização em solução denaturante, foi eficiente para a dissolução protéica e inibição de Rnases, sendo adequada para iniciar o protocolo de extração de RNA viral de amostras de sêmen

Extração de DNA.

Regras de segurança em laboratórios; Extração de DNA; Extração de RNA; Quantificação em espectrofotômetro; Reação em cadeia da polimerase (PCR); Enzimas de restrição; Eletroforese de ácidos nucléicos; Seqüenciamento; Síntese de DNA complementar (CDNA

Avaliação de protocolos de extração de DNA genômico total em Mentha arvensis L.

A espécie Mentha arvensis L., conhecida popularmente como vick, é uma importante fonte de óleos essenciais usados principalmente em aromatizantes, indústria farmacêutica e como condimento alimentar. Devido seu valor econômico, torna-se importante a realização de estudos moleculares, muitos destes baseados em marcadores de DNA. Avaliou-se então, o desempenho de diferentes métodos de extração de DNA em Mentha arvensis L., onde se aplicou quatro protocolos de extração de DNA vegetal. As amostras foram quantificadas em gel de agarose a 0,8%. Observou-se que apenas dois dos quatro métodos aplicados resultaram em DNA e que houve diferenças quanto à qualidade das amostras. Entre os métodos que foram eficientes para o isolamento de DNA em Mentha arvensis L., observa-se que em um deles, as amostras apresentaram quantidades constantes de DNA, enquanto o outro, apesar de ter resultado em boas concentrações de DNA, as diferentes amostras não apresentaram concentrações constantes. Verificou-se que houve co-isolamento de RNA nas amostras, esta condição é devida ao fato de não haver sido aplicada RNAse durante o processo de extração. Após o estudo, sugere-se então o método que apresentou DNA de qualidade e em quantidade satisfatória para estudos moleculares